Stammbelegschaft der „Nachtschicht“ sind TC, Topher und Drew, alles drei Ärzte, die auch in Afghanistan im Einsatz waren. TC, ein ausgezeichneter und widerspruchsfreudiger Arzt hat allerdings ein Trauma aus dieser Zeit mitgenommen. Jordan, TCs Ex, setzt es als Frau bei ihrem Chef Ragosa durch, dass sie die Leitung der Nachtschicht übernimmt. Paul und Krista, zwei neue Assistenzärzte in der Nachtschicht, verdienen sich ihre erste Sporen und TC kämpft seinen immer wieder aufflammenden Kampf mit dem Klinikchef Ragosa, einem zunächst unsympathisch wirkenden Ehrgeizling, der sich immer mehr als durchaus sensibler und auch fähiger Mann erweist.